血液基因组DNA提取可以对各类哺乳动物或禽类进行DNA提取，使用核酸提取磁珠对血液进行基因组DNA提取，随着磁珠法核酸提取技术的不断普及，越来越多的实验室会进行磁珠法DNA提取，在使用的初期阶段，也会遇到各种各样的问题，近期就有许多老师和我们讨论如何利用磁珠进行血液DNA提取，我们对其中的常见问题进行了总结，供大家参考。

1、全血上样量与裂解体系

       全血样本的上样量是DNA提取的问题，不同的上样量对应不同的试剂体系，上样量过多或多少都会影响裂解的效果。以GNT-B02的磁珠法血液DNA提取试剂盒为例，标准上样量为200ul，上下浮动不超过100ul，搭配的裂解液用量为300-400ul，有些老师由于实验要求，需要大体积的上样量，这在实际操作中，就需要对磁珠法血液DNA提取的操作流程进行改良，一般的改良思路是按比例放大裂解体系；但有些实验的上样量达到毫升以上，这种情况下，就不能再简单的放大裂解体系了，需要先用红细胞裂解液对样品进行处理，将上样体积浓缩后，再进行血液DNA提取的操作流程优化。

2、磁珠结团

      磁珠的现象是实验中可以观察到的，由于磁珠本身特性和磁珠所处试剂环境两方面造成的，有些磁珠不仅在血液DNA提取过程中会结团，在其他的样本提取中也同样会结团，有些老师在初次遇到这种现象的时候会感觉不适应，其实结团现象可以用来提前预判实验结果，结团往往是吸附了大量核酸，如果哪次实验没有结团，本次的实验结果或许会不太好，不过也不能一概而论，杂质太多也是引起磁珠结团的原因。

       通过修改试剂配方，优化试剂配置，可以改善磁珠法血液DNA提取过程中的结团现象，但是该工作较为复杂，需要对各种参数进行调整。但是对于磁吸速度较慢的磁珠，结团后能明显提高磁吸速度，提高实验效率，只要磁珠在洗脱步骤能够分散，而且结果也在标准范围内，磁珠结团并不会影响整体效果。

3、得率低

       得率是影响下游实验的***直接因素，根据我们的经验，200ul的全血，得率一般在3ug以上，用GNT-B02的磁珠法血液DNA提取试剂盒，能稳定在5ug以上，有些老师的实验结果只有2ug左右，甚***更低，这就需要***排查两个环节，一是裂解环节，二是洗脱环节，若是裂解环节的问题，往往会是在结合的时候磁珠不结团，或在洗涤的时候上清液颜色为深***或红色，这种情况下，更换全新的裂解液，并且严格按照SOP操作是较为效率的解决办法。

       洗脱环节的问题，经常表现为结团的磁珠未被打散，可考虑加大震荡力度，或用吸头吹吸、搅拌。有些老师在得率较低的时候，喜欢加大上样量，这可能会适得其反：过大的上样量会抑制裂解液的裂解能力。

4、纯度低

       纯度是判断实验结果的重要因素之一，一般表现为A260/A280和A260/A230，简单来讲，A260是核酸的吸光值，A280是蛋白的吸光值，A230是杂质（主要是盐类）的吸光值，对于血液DNA的磁珠法提取结果，A260/A280要在1.7-2.0之间，低于1.7存在蛋白污染，高于2.0存在RNA污染；无论高或低，主要是裂解的影响，需对裂解环节进行优化；A260/A230一般要求大于1.5，能大于1.8或2.0，若A260/A230小于1.5，则认为存在污染，首先考虑盐类的污染，需对洗涤环节进行优化，其次考虑醇类的污染，需对晾干时间进行优化，有些提取结果的A260/A230异常的高，能达到十几甚***几十，这样的现象并不能很准确的分析是由什么原因造成的，需要通过下游实验进行验证。诚然，对于常规的PCR来讲，对纯度的要求并不高，甚纯度不达标时，通过优化PCR体系，也可以实现PCR的顺利进行，但对于一些要求的较高的下游实验，纯度就是很重要的参考，需要在标准范围内才能顺利进行。

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