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你是那10%正确使用Millipore超滤管的达人吗?

作者: 发布时间:2017-12-23 浏览次数:1273
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      超滤是大分子脱盐、浓缩***方便的方法,重复性好,已经在蛋白、抗体、病毒、外泌体、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作。

       默克生命科学旗下品牌Millipore的Amicon Ultra超滤管采用离心方式快速处理样品,是很多科研小伙伴们每天要用到的基本装备。但是,在默克生命科学团队推出超滤管中文说明书(0.5、4、15)之前,我们发现近90%的使用者在选择和使用过程中因为缺乏必要信息而没有获得***佳体验,更重要的是,宝贵的样本会遭受本可避免的损失!

•  选对截留分子量,事半功倍

       如果目的蛋白是120kDa,请问应该选择的超滤管规格是100k、50k,还是30k甚至10k?你采用1/2、1/3抑或1/6算法?这些没有统一的说法,是因为不同厂家对膜的截留分子量的定义不同。Millipore超滤管采用其特有的再生纤维素膜,定义为:一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子,即100kDa的球形蛋白用100k的Ultracel再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下Millipore官方数据:

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       截留分子量选小啦!看到这个表,你是否发现原来抱怨Millipore超滤管流速偏慢的根源来自对Millipore截留分子量定义的误解?膜孔径要小于目的分子。因为样品分子形状不同,为了***大化样品的回收,对于没有参考的样品,可以初步选择截留分子量约为目的分子分子量1/2的膜。

•  倒转离心,***大化回收率

收取体积已经很小的浓缩好的样品时,你会:

⊙ 购买***尖细的枪头,把样品吸回来

⊙ 浓缩倍数低一点,以便用枪头把样品吸回来

⊙ 反转离心回收,获得***高得率

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***后一个,你答对了么?

       Millipore Amicon Ultra系列超滤管上样体积有0.5/2/4/15/70mL等五种,除了采用低吸附的管材和***低蛋白吸附的再生纤维素超滤膜,其中0.5mL、2mL和70mL的规格还特别设计了反转回收模式,以便使已经浓缩的样品***大化回收。现在你总该知道为什么收到产品时会有两个外管了吧~

•  脱盐浓缩,一个超滤管搞定

       浓缩用超滤管,脱盐用透析袋或脱盐柱,这是很多实验室一直沿用的实验操作。其实呢,超滤管做“脱盐+浓缩”,也是很多蛋白操作高手的小诀窍。Millipore中文官方说明书特别给大家提示了这个方法——用更少的工具和更短的时间,减少转移误操作和样品损失,却能获得更好处理效果,你get了吗?

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