众所周知，在基因编辑领域，MIT的张锋教授、美国加州大学伯克利分校教授Jennifer Doudna、德国马普感染生物学研究所教授Emmanuelle Charpentier、哈佛大学遗传技术狂人George Church等一众大咖***着这个领域的发展。然而，自打单碱基编辑技术出现之后，哈佛大学的David Liu教授团队逐渐***这一细分领域，成了名副其实的基因编辑技术大牛，未来很有可能持续走热。

       耳聋作为***常见的感觉性损伤，大约50％是由遗传因素导致的，而TMC1便是引起遗传性耳聋的常见基因之一，TMC1突变可引起常染色体隐性和常染色体显性非综合征型耳聋。

       近日，十大人物的同一期《自然》期刊，David Liu教授研究团队再次发布了一项CRISPR重磅研究，利用单碱基编辑技术成功修复了名为“贝多芬小鼠”小鼠的TMC1基因突变，从而减少了小鼠的听力损失，为遗传性耳聋的基因治疗奠定了基础。

       单碱基编辑技术是基于CRISPR-Cas基因编辑系统开发出来的一种有用的单个碱基替换手段。其主要是通过将失去酶活性的dCas9蛋白与脱氨基酶比如APOBEC1或者AID融合而成，因此，既具有了dCas9结合特定DNA序列的定位能力，又具有改变碱基的能力。

       这里就不得不提到一类能够将胞嘧啶（C）变成胸腺嘧啶（T）的酶（实际上是先将C变成U，然后通过细胞中DNA的修复或复制机制将U变成T），叫做胞嘧啶核苷脱氨酶（cytidine deaminase），比如APOBEC1 (apolipoprotein B editing complex 1) 或者AID (activation-induced deaminase)等等。将这些酶与基因编辑工具比如ZFN、TALEN或者dCas9等等蛋白质融合，就可以在特定的位点将C转变成T，从而达到修复突变的目的（原理如下图）。

▲单碱基编辑技术的原理图

       利用单碱基编辑技术修复基因突变这个过程是怎样的呢？

       如上面的图所示，这里举的是dCas9与胞嘧啶核苷脱氨酶融合催化特定序列的C变成T的过程。首先是dCas9-cytidine deaminase复合物在引导RNA的引导下与特定位点的基因组DNA结合，目的是要把这个位点的C（或G）突变变成T（或A）；复合物结合到靶序列之后，接着cytidine deaminase催化C脱氨基变成U（尿嘧啶），由于尿嘧啶U不是DNA中的碱基类型，并且另一条DNA链中的G和U也不配对，因此接下来就会在DNA复制或者DNA修复的过程中，U（或者G）就被替换成T（或者A），从而达到了将C（或者G）变成T（或者A）的目的。

       众所周知，在基因编辑领域，MIT的张锋教授、美国加州大学伯克利分校教授Jennifer Doudna与德国马普感染生物学研究所教授Emmanuelle Charpentier、哈佛大学遗传技术狂人George Church等一众大咖***着这个领域的发展，发表国际***期刊《自然》、《科学》及《细胞》等大文章发到手软。

       而自打哈佛大学的David Liu团队进入单碱基编辑这一领域之后，便在这一领域一骑绝尘！事实上，单碱基编辑技术很大程度上是由David Liu团队改造并持续***这一领域的发展。其发明的单碱基编辑技术采用dCas9融合大鼠的rAPOBEC1，目前都已经开发到***，简称BE4

       目前都已经开发出哪些应用于单碱基编辑的工具了呢？

       主要有下面这几种：1）dCas9融合大鼠的rAPOBEC1，目前都已经开发到***，简称BE4；2）dCas9融合七鳃鳗或者人的AID （activation-induced cytidine deaminase, AID），简称Target-AID；3）CRISPR-x，由dCas9以及sgRNA组成，只不过这个sgRNA包含有MS2 RNA短发加结构，这样一来，这种sgRNA就可以招募MS2蛋白融合的AID进行base editing；4）ZFN或者TALEN融合的AID或者APOBEC。这些相应的base editing工具总结如下面的Table1所示（不完全统计）。

▲Table1：部分单碱基编辑工具总结

▶应用领域◀ 

       那么，这些单碱基编辑方法目前有哪些应用呢？或者未来可能能够应用到哪些方面呢？

       主要可能有这几个方面：首先，可以应用于基因突变疾病的修复治疗研究；其次，应用于动物模型的研究及细胞研究；第三，可以应用于农业领域；第四，可以结合sgRNA库应用于基因或者药物的大规模筛选（如下面的图A-C所示）。

▲单碱基编辑工具的应用举例总结

       精确***的单碱基编辑成功，是一个重大的进步。与传统的CRISPR-Cas基因编辑相比，单碱基编辑技术不需要核酸链的完全断裂，于是大大避免了因修复核酸链断端而引入的错误，可以在很多情况下大大降低脱靶率。