5月19日，由生物谷主办的“2018（第九届）细胞治疗国际研讨会”在 上海小南国花园酒店***闭幕。美国宾夕法尼亚大学的赵阳宾副教授受邀做了极为精彩的报告。

在生物谷主办的2018（第九届）细胞治疗国际研讨会上，赵阳兵教授发表了题为“Use CRISPR gene editing to improve T cell adoptive immunotherapy for cancers”的演讲，从通用型CAR-T细胞、NY-ESO-1 TCR的发展、使用PD1-CD28转换受体克服肿瘤微环境抑制和使用CRISPR文库筛选T细胞等四个方面，展示了CRISPR技术在CAR-T和TCR-T细胞中广阔的应用前景。

CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）是一种细菌对抗外来入侵基因的免疫系统。外来基因整合进细菌的基因组后，会转录出一段RNA，可引导带有DNA内切酶活性的Cas蛋白寻找入侵序列，然后将该序列切除。后来，科学家们发现可以利用CRISPR/Cas9定向切除目标基因，从而达到基因编辑的目的。如今，廉价、快捷且操作简单的CRISPR/Cas9基因编辑系统已成为生命科学领域***热门的技术之一。

如果将CRISPR和CAR-T技术相结合，又会产生怎样的效果呢？赵阳兵教授也给出了答案——通用型CAR-T细胞（universal CAR-T cells）。为了避免免疫抑制带来的副作用，现阶段的CAR-T细胞治疗是高度特异性的。我们需要先获得患者自身的T细胞，在体外对T细胞进行修饰和扩增后，再把制备好的CAR-T细胞回输进特定患者的体内。整个过程耗时长且费用高，现已上市的两个CAR-T疗法报价均在40万美元左右。而通过CRISPR技术特定敲除T细胞的TCR, HLA-I, PD-1和CTLA-4后，理论上可以解除免疫系统对非自体来源的CAR-T细胞的抑制，使CAR-T细胞成为一种通用型的产品，从而实现大规模生产和成本降低的目标。并且有实验证明，使用CRISPR敲除TCR后，CAR-T细胞仍可保持应有的扩增能力和抗肿瘤效果。

同时，赵教授也介绍了CRISPR技术在靶向NY-ESO-1的TCR-T 细胞的应用。天然筛选到的TCR一般活性较弱，而通过基因突变的方法可以提高TCR的亲和力和活性。但是，大多数高亲和力的TCR特异性会明显下降，从而导致其靶向性下降而产生严重的临床毒性。目前赵阳兵教授实验室主要采用的方法是用CRISPR技术敲除内源性TCR，从而增加转基因TCR的亲和力和TCR-T细胞的抗肿瘤能力。敲除内源性TCR的TCR-T在体外实验或小鼠肿瘤模型中，可以达到和亲和力增强型TCR一样好的效果，而不用担心脱靶副作用。

在肿瘤微环境中，有多种抑制T细胞增殖的机制，其中***常见的便是PD-1/PD-L1系统。但现在，我们可以通过分子生物学方法将PD-1的胞外区和CD28的胞内区链接起来，构建PD1-CD28转换受体（Co-delivering PD1-CD28 switch receptor），从而将抑制信号转换为刺激信号，大大增强了CAR-T在体内的增殖和抗肿瘤能力。

***后，赵阳兵教授介绍了CRISPR/CAR T文库在T细胞筛选中的作用。CRISPR/CAR T文库为多种T细胞的混合物，每种T细胞均被敲除了一个不同的特定基因。而CRISPR/CAR T文库检索可以帮我们定位新的潜在作用靶点。

之后，赵阳兵教授实验室将把CRISPR技术应用到NY-ESO-1 TCR-T项目。这个项目主要是在T细胞中敲除内源性TCR和PD-1，再把靶向NY-ESO-1的TCR转入到T细胞内。项目的临床试验申请刚刚获得了美国FDA批准，也是美国***个使用CRISPR基因编辑技术的临床试验，计划将于年底展开。

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