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目前蛋白质表达谱的研究有两个技术难题，一是如何保证蛋白质来源的均一。因为体内组织器官各种细胞混杂在一起，如各类神经元细胞，突触很长，难于分离纯化。二是如何在体内动态观察某类或某些细胞的蛋白质的代谢。
今天荷叶给大家介绍一种体内细胞特异的蛋白质代谢谱标记方法，该方法对蛋白质表达谱的研究十分有用，希望对科研狗们有点用。
细胞蛋白质标记的基本原理：蛋白质的合成依赖于转运tRNA合成酶，不同的氨基酸有特定的转运tRNA合成酶。通过对特定转运tRNA合成酶进行突变使其改变转运氨基酸的种类，转运非经典的氨基酸。
外源补充非经典的氨基酸后，待细胞利用非经典氨基酸合成新蛋白后，通过“点击化学”（Click Chemistry）的方法将含有非经典的氨基酸的蛋白质进行标记，可以分离纯化新合成的蛋白质。
然后进行质谱分析（BONCAT，bio-orthogonal non-canonical amino-acid tagging，生物正交非经典氨基酸标记），也可以对非经典氨基酸进行荧光标记，在体观察蛋白质的合成（FUNCAT，fluorescent non-canonical amino-acid tagging）。
甲硫氨酸转运tRNA合成酶的突变，转运叠氮正亮氨酸ANL
叠氮与炔基的点击化学反应
如何实现细胞特异的蛋白质标记呢？可以利用Cre-loxp系统，利用细胞特异的启动子驱动突变的转运tRNA合成酶，在特异的细胞、特定的时间表达突变的转运tRNA合成酶。
